Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

После каждого взятия крови пробы центрифугируют в течение 5 мин при температуре 5°С и при величине относительного центробежного ускорения (ОЦУ), равной 1500 g (Примечание 3). От каждой пробы отбирают, например, по 10 мкл плазмы и переносят в микрокювету плоскодонного 96-луночного планшета, который можно хранить при температуре от 6 до 8°С до окончания испытания. Перед определением концентрации глюкозы в каждую микрокювету с плазмой добавляют по 240 мкл готового энзимо-хромогенного набора, например, реактива «GLUCOSE Liquicolor» или аналогичного. Планшеты инкубируют при температуре (37 ± 1) ° С не менее 20 мин. Измерение оптической плотности проводят при длине волны 492 нм. В качестве раствора сравнения используют стандартный раствор глюкозы с концентрацией 5,55 ммоль/л (100 мг %), входящий в состав готового энзимо- хромогенного набора. Концентрацию глюкозы (с) в крови рассчитывают по формуле: с = А А 0 ∗ 100 мг %, где А - оптическая плотность пробы; А 0 - оптическая плотность глюкозы в растворе сравнения. Примечание 1 Приготовление основных растворов СО и ИО инсулина или его аналога. Навеску СО инсулина растворяют в 0,2 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты до полного растворения субстанции, а затем добавляют растворитель для получения раствора с концентрацией инсулина 100 МЕ/мл. В качестве растворителя используют 0,1 М раствор кислоты хлористоводородной, разведенной в 33,3 раза раствором натрия хлорида 0,9% для инъекций. Основной раствор следует хранить при температуре от 2 до 8°С. Замораживание не допускается. Раствор должен быть прозрачным. При определении биологической активности субстанции инсулина основной раствор готовят таким же образом, что и основной раствор СО. Разведение субстанции проводят, исходя из величины биологической активности инсулина с учетом фактического содержания влаги. 1126