Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

Особенности измерения активности ферментов, описываемые в фармакопейных статьях, определяется их принадлежностью к тому или иному классу. Принцип, положенный в основу всех методов определения активности фермента ( Е ), заключается в регистрации скорости убыли субстрата ( S ) (то есть вещества, на которое действует фермент) или скорости образования продукта реакции ( P ). Простейшей схемой для описания кинетики ферментативных реакций является так называемая двухстадийная схема: (1) где: Е – фермент; S – субстрат; P – продукты реакции; k кат – каталитическая константа. Начальная скорость ( υ o ) катализируемой ферментом реакции, при которой расходом субстрата можно пренебречь, описывается уравнением Михаэлиса–Ментен (2): υ o = k кат ∙ [ E ] 0 ∙ [ S ] 0 = V макс ∙ [ S ] 0 ,(2) K м + [ S ] 0 K м + [ S ] 0 где: V макс = 0 кат ][ k E  – максимальная скорость реакции; [ E ] 0 – начальная концентрация фермента; K м – константа Михаэлиса. Для аллостерических ферментов начальная скорость ферментативной реакции не подчиняется уравнению Михаэлиса–Ментен. Для определения скорости ферментативной реакции через определенные промежутки времени отбирают пробы из реакционной смеси и E + S ES E + P, k кат 1326