Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

(рис. 2). Отрезок на оси абсцисс, соответствующий скорости, равной половине максимальной, будет представлять собой К м . При проведении ферментативной реакции реакционная смесь должна содержать такое количество субстрата, которое обеспечит насыщение фермента в течение всего хода определения (количество субстрата, взятого для проведения ферментативной реакции, должно быть примерно на 30% выше насыщающей концентрации). Если форма кривой зависимости начальной скорости реакции ( υ o ) от начальной концентрации субстрата ([ S ] 0 ) отличается от гиперболической, определение параметров по уравнению Михаэлиса–Ментен невозможно. Такие отклонения наблюдаются в случае ингибирования или активации фермента субстратом, а также при работе с аллостерическими ферментами. В этом случае оптимальной является та концентрация субстрата, при которой начальная скорость реакции максимальна ([ S ] опт )– точка перегиба на экспериментальной кривой зависимости начальной скорости реакции от начальной концентрации субстрата (рис. 2). После выбора насыщающей концентрации субстрата необходимо проверить, сохраняется ли при ней линейная зависимость [ P ] от t . В качестве субстратов используются как природные вещества, такие как альбумин, казеин, крахмал, так и синтетические. Природные субстраты ферментов используют большей частью для подтверждения подлинности. Синтетические субстраты обеспечивают более высокую точность и лучшую воспроизводимость при количественном определении ферментативной активности. 3. Концентрация фермента ([ Е ] 0 ). В соответствии с уравнением Михаэлиса–Ментен начальная скорость ферментативной реакции ( υ o ) в подавляющем большинстве случаев линейно зависит от концентрации фермента ([ E ] 0 ). Выбор оптимальной для каждого метода концентрации 1329