Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

веществами. Испытуемый раствор инкубируют с моноцитами человека, например: - с гепаринизированной периферической кровью человека, желательно, отобранной не более, чем за 4 ч до испытания; - с моноцит-содержащей фракцией крови, например, содержащей мононуклеарные клетки периферической крови человека (МКПК), выделенные путем центрифугирования в градиенте плотности или иным способом; - с линией моноцитоподобных клеток (моноцитов) человека. Гепаринизированную периферическую кровь человека разводят культуральной средой (% (v/v)) или 0,9 % раствором натрия хлорида до концентраций от 2 до 50 %. В испытании используют МКПК или линии моноцитоподобных клеток в культуральной среде с добавлением плазмы донора или сыворотки крови группы IV (AB) с концентрацией клеток в суспензии 0,1-1,0 ˑ10 6 клеток/мл. При использовании линий моноцитоподобных клеток сыворотку группы крови IV (АВ) можно заменить на бычью эмбриональную сыворотку, инактивированную нагреванием. Культуру клеток готовят при температуре 37 ± 1°С в увлажненной атмосфере с 5% С0 2 . Культура клеток, используемая для выделения маркеров ПВ, должна быть функционально стабильной. Реакцию выделенного маркера сравнивают с реакциями на стандартный эндотоксин или на серию ЛС, утвержденную в качестве контрольной. Реакцию выбранного маркера калибруют с использованием соответствующего стандарта. ПОДГОТОВКА К ИСПЫТАНИЯМ Стеклянная и пластиковая посуда, используемая в испытании не должна содержать пирогенных веществ, в количествах, определяемых в тесте, и не оказывать влияние на ход реакции. Всю стеклянную посуду и другую аппаратуру, устойчивую к нагреванию, депирогенизируют в сухожаровом шкафу при температуре 250°С не менее 30 мин в соответствии с валидированной процедурой. 1358