Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

Этап введения пробы осуществляют в один прием, когда образец смешивается с амфолитами и вводится в капилляр под давлением или под вакуумом, или в несколько приемов, когда в капилляр последовательно вводится ведущий буферный раствор, амфолиты, образец, смешанный с амфолитами, снова амфолиты и, наконец, заключающий буферный раствор. Объем образца должен быть достаточно малым, чтобы не изменять рН- градиент. На этапе фокусирования амфолиты движутся после приложения напряжения к катоду или аноду согласно их суммарному заряду, создавая, таким образом, рН-градиент от более низкого рН (у анода) к более высокому рН (у катода). Движение каждого аналита продолжается до тех пор, пока он не достигнет рН, соответствующего его изоэлектрической точке (p I ). На этапе мобилизации полосы разделенных компонентов приводятся в движение в сторону детектора благодаря электроосмотическому потоку путем приложения давления после стадии фокусирования или с помощью добавления солей к флакону у катода или анода. Достигнутое разделение, выражаемое как ∆p , зависит от градиента рН pH � , количества амфолитов, имеющих различные значения p I , молекулярного коэффициента диффузии ( D ), интенсивности электрического поля ( E ) и вариации электрофоретической подвижности аналита в зависимости от рН − μ pH� : ∆p = 3 ∙ � ( pH � ) ( − μ pH� ) . (12) Основными параметрами, которые следует учитывать при разработке разделения, являются: 645