Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

Компоненты раствора Объем компонента (мл) на ячейку заданного объема 5 мл 10 мл 15 мл 20 мл 25 мл 30 мл 40 мл 50 мл 1 2 3 4 5 6 7 8 9 14% акриламида Вода очищенная 1,4 2,7 3,9 5,3 6,6 8,0 10,6 13,8 Раствор акриламида 1) 2,3 4,6 7,0 9,3 11,6 13,9 18,6 23,2 1,5 М Трис (рН 8,8) 2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 100 г/л SDS 3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 100 г/л APS 4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 TEMED 5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 15% акриламида Вода очищенная 1,1 2,3 3,4 4,6 5,7 6,9 9,2 11,5 Раствор акриламида 1) 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 15,0 20,0 25,0 1,5М Трис (рН 8,8) 2) 1,3 2,5 3,8 5,0 6,3 7,5 10,0 12,5 100 г/л SDS 3) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 100 г/л APS 4) 0,05 0,1 0,15 0,2 0,25 0,3 0,4 0,5 TEMED 5) 0,002 0,004 0,006 0,008 0,01 0,012 0,016 0,02 Таблица 2 – Приготовление концентрирующего геля Компоненты раствора Объем компонента (мл) на ячейку заданного объема 1 мл 2 мл 3 мл 4 мл 5 мл 6 мл 8 мл 10 мл Вода очищенная 0,68 1,4 2,1 2,7 3,4 4,1 5,5 6,8 Раствор акриламида 1) 0,17 0,33 0,5 0,67 0,83 1,0 1,3 1,7 1,0М Трис (рН 6,8) 6) 0,13 0,25 0,38 0,5 0,63 0,75 1,0 1,25 100 г/л SDS 3) 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1 100 г/л APS 4) 0,01 0,02 0,03 0,04 0,05 0,06 0,08 0,1 TEMED 5) 0,001 0,002 0,003 0,004 0,005 0,006 0,008 0,01 1) Раствор акриламида: 30% раствор акриламида/бисакриламида (29:1) 2) 1,5М Трис (рН 8,8): 1,5 М буферный раствор трис-гидрохлорида, рН 8,8 3) 100 г/л SDS: раствор натрия додецилсульфата 100 г/л 4) 100 г/л APS: раствор аммония персульфата 100 г/л. Аммония персульфат является источником свободных радикалов, которые управляют полимеризацией акриламида и бисакриламида. Таким образом, раствор аммония персульфата должен добавляться медленно. 5) TEMED: тетраметилэтилендиамин. 6) 1,0М Трис (рН 6,8): 1 М буферный раствор трис-гидрохлорида, рН 6,8 Гель со вставленной гребенкой оставляют в вертикальном положении при комнатной температуре до окончания полимеризации. Если в фармакопейной статье нет других указаний, то определение молекулярных масс проводят при нагрузке на лунку 10 мкг общего белка, а 660