Фармакопея. Издание XIV. Том I. Введение, Общие положения, Методы анализа лекарственных средств. Реактивы

V i – объем элюирования i -ой части пика декстрана на хроматограммах каждого из калибровочных растворов (или i -ой части пика глюкозы на хроматограмме маркерного раствора для определения рабочего объема колонки). Аналогичным образом для пиков каждого из калибровочных декстранов и глюкозы по формуле (1) рассчитывают коэффициент распределения K макс . , соответствующий вершине пика. Используя подходящее программное обеспечение строят зависимость полученных значений K макс. (ось абсцисс) от заявленной молекулярной массы в максимуме пика ( M макс. ) каждого из декстранов, использованных для калибровки, и глюкозы (ось ординат). Полученную зависимость аппроксимируют уравнением вида (2). Используя значения K i , рассчитанные по уравнению (1) для соответствующих частей пиков калибровочных декстранов и глюкозы, вычисляют значения M i , а затем, значения M w по уравнениям (2) и (3). = 5 + ( 4 + 1 + 2 2 + 3 3 ) , (2) w = ∑ =1 ∑ =1 , (3) где p – число частей, на которые поделен хроматографический пик; y i – высота i -ой части пика над базовой линией; M i – молекулярная масса i -ой части пика; w – расчетное значение среднемассовой молекулярной массы. Рассчитанные значения w для калибровочных декстранов и глюкозы сравнивают с паспортными значениями. При необходимости, используя подходящие программное обеспечение и алгоритм аппроксимации калибровочной кривой нелинейным методом наименьших квадратов (например, методом Гаусса-Ньютона), выполняют итерационный подбор коэффициентов b 1 –b 5 в уравнении (2), добиваясь выполнения условий пригодности калибровки (см. раздел «Проверка пригодности системы и калибровки»). 725