Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

– приготовление питательной среды, состав которой состоит из 100 мл раствора Эрла, 20 mМ HEPES, 4,0 мл куриного эмбрионального экстракта, 4,0 мл сыворотки крови плода корoвы, 10 мл 1% агара, разогретого до температуры 40 – 50 ºС, и антибиотиков. Среду разливают в лунки пластиковой панели, закрывают крышкой и оставляют при температуре 20 – 22 °С до застывания среды. После этого в лунку со средой помещают фрагмент кожи (5-7 мм) 9 сут куриного эмбриона. Испытуемые клеточные культуры снимают с подложки общепринятым методом, ресуспендируют в питательной среде 199, и на три кожных фрагмента наносят по 1,0 мл испытуемой клеточной суспензии в виде капли в концентрации 10 6 кл/мл. Таким же образом на 2 - 3 кожных фрагмента наносят суспензию клеток HeLa (положительный контроль). В качестве отрицательного контроля оставляют 2 - 3 неинокулированных фрагментов кожи. Панель закрывают крышкой и инкубируют в атмосфере СО 2 при температуре 36 - 37 ºС. Через 72 ч инкубации готовят гистологические препараты фрагментов кожи толщиной по 5 – 7 микрон и окрашивают гематоксилин-эозином. Опыт учитывают, если: а) в контрольных фрагментах кожи не отмечено признаков деструкции органной культуры; б) в положительном контроле имеются признаки инвазии испытуемых клеток в органные культуры кожи куриного эмбриона, т.е. проникновение и распространение пролиферирующих клеток в собственно дерму. Клетки испытуемых клеточных культур рассматривают как туморогенные, если хотя бы в одном из образцов органной культуры наблюдается инвазивный рост. Изучение онкогенности 2848