Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

Полимеразная цепная реакция ОФС.1.7.2.0013.15 Полимеразная цепная реакция (ПЦР) представляет собой многократное ферментно-опосредованное умножение (амплификацию) заданного участка ДНК длиной от десятков до нескольких тысяч пар оснований (п.о.), границы которого соответствуют коротким олигонуклеотидным последовательностям – праймерам, т.е. ПЦР представляет собой циклический синтез in vitro выбранного фрагмента ДНК. Каждый цикл состоит из трёх этапов: денатурации, гибридизации и синтеза цепи ДНК. Для выявления РНК- содержащих микробов ПЦР проводят после процедуры обратной транскрипции. Специфичность реакции обеспечивается прежде всего правильным выбором праймеров. По окончании реакции наличие искомого фрагмента выявляют различными методами. Наиболее распространены электрофоретическое разделение и детекция флуоресценции в режиме реального времени. ПЦР может применяться как качественная реакция (по принципу «есть – нет»), так и как полуколичественный или количественный метод. Для проведения анализа могут быть использованы наборы реагентов для ПЦР, зарегистрированные в установленном порядке и валидированные для соответствующих целей. Пробоподготовка Определяемая ДНК может быть выделена из исследуемого образца или может вноситься в реакцию без предварительной подготовки. В первом случае следует подтвердить, что процедура выделения не 2901