Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

Испытание клеточных культур адаптированных к суспензионному культивированию, вирусных штаммов, вирусных сборов, и других вирусных суспензий на присутствие микоплазм проводят с использованием индикаторной клеточной культуры, как правило, после нейтрализации вируса специфической иммунной сывороткой, не обладающей ингибирующим действием в отношении микоплазм. Также может быть использована клеточная культура не чувствительная к размножению вируса. Методика испытания методом индикаторной клеточной культуры (цитохимическим методом) Испытание на присутствие микоплазм методом индикаторной клеточной культуры проводят в асептических условиях, выполняя следующие операции. 1. В стерильную чашку Петри (диаметр 90 мм) помещают предварительно подготовленное предметное стекло и вносят 20–23 мл суспензии клеточной культуры Vero в питательной среде Игла МЕМ или ДМЕМ в концентрации не более 10 5 кл/мл и добавляют не более 5 % сыворотки крови плодов коровы, предварительно прошедшей контроль на стерильность и отсутствие контаминации микоплазмами. 2. Вносят 1,0 мл испытуемого образца в чашку Петри с клеточной суспензией культуры Vero и инкубируют в течение 3–5 сут при температуре (36 ± 1) о С в атмосфере с (5,0±0,5) % СО 2 до формирования 50-70 % монослоя. Образование монослоя наблюдают в световом микроскопе при увеличении ок.10×, об.20×. 3. По достижении 50-70 % клеточного монослоя культуральную жидкость сливают, осторожно промывают стекло фосфатным буферным раствором (рН 7,2-7,4), используя не менее 100мл. 4. Помещают предметное стекло на 30–35 мин в 96 о этиловый спирт. 3006