Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа
образования зависит от соотношения содержания трипсина к белку в реакционной смеси. Для предотвращения автогидролиза растворы протеаз готовят при рН, отличном от оптимального (например, при рН 5 для трипсина), благодаря чему фермент не переходит в активное состояние до момента разведения с буферным раствором. В некоторых случаях, при использовании трипсина для расщепления пептидных связей белка с молекулярной массой более 100 000 Да, может потребоваться защита лизиновых остатков путем получения производных с лимонной или малеиновой кислотой, так как в противном случае может образоваться слишком большое число пептидных фрагментов. Требования к реагентам для расщепления пептидных связей. Под реагентами в процедурах пептидного картирования подразумеваются химические агенты и ферменты, используемые для расщепления пептидных связей. Требования к квалификации и качеству реагентов должны быть указаны в нормативной документации. Использование реагентов, особенно ферментов, квалификации и качества отличных от установленной в ходе валидации методики, например другого производителя, нежели указано в нормативной документации, может привести к невоспроизводимости хроматографических профилей. В случаях, когда требуется какая-либо специальная подготовка реагента, например, для обеспечения определённой чистоты фермента или химического агента, эти процедуры должны быть описаны в нормативной документации Установление оптимальных условий для расщепления пептидных связей. Факторы, которые влияют на полноту и эффективность расщепления протеинов, являются факторами, оказывающими влияние на химические и ферментативные реакции. 3040
Made with FlippingBook
RkJQdWJsaXNoZXIy NDU0NjM=