Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

Тандемная масс-спектроскопия также используется для определения последовательности модифицированных белков и для определения типа произошедшей аминокислотной модификации. Идентификация полученных фрагментов может быть осуществлена с помощью современных компьютерных баз данных. Определение расположения дисульфидных связей в различных сульфгидрил-содержащих пептидах может быть произведено методом сравнения масс-спектров продукта расщепления до и после восстановления. Если некоторые части первичной структуры не могут быть достаточно четко отражены пептидной картой, может потребоваться составление вторичной пептидной карты. Получение вторичной пептидной карты заключается в выделении полученных при гидролизе пептидных фрагментов с последующим их вторым расщеплением в выбранных условиях, хроматографическим разделением, обнаружением и идентификацией. Выделение пептидных фрагментов после первого гидролиза проводится, как правило, методами колоночной хроматографии. Условия гидролиза, разделения и идентификации при получении вторичной пептидной карты отличаются от условий получения первичной пептидной карты. Для каждого из белков характерна совокупность уникальных свойств, обусловленных его первичной структурой и структурами более высокого порядка. Пики пептидных фрагментов наиболее характерных для данного пептида и/или отражающих наиболее важные свойства испытуемого пептида, например, комплимент зависимую область, выбираются в качестве характерных (реперных) пиков. Выбор реперных пиков должен быть обоснован, а перечень реперных пиков приводится в нормативной документации. Валидация. Методики пептидного картирования подлежат валидации. Характеристики, подлежащие валидации определяются критическими параметрами испытания, влияющими на интерпретацию результатов и их 3046