Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кюветах с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения – буферный раствор. Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3): = Aп−Ao Aк−Ao , где: Ап – среднее значение оптической плотности испытуемой пробы; Ао – среднее значение оптической плотности контрольной пробы без гемолиза; Ак – среднее значение оптической плотности контрольной пробы с полным гемолизом. С помощью программного обеспечения или на миллиметровой бумаге с логарифмическим масштабом строят график со значениями Y/(1-Y) по оси абсцисс и количеством разведенного комплемента (в мл) по оси ординат. Получают оптимизированную кривую (при построении графика учитываются значения степени гемолиза, находящиеся в диапазоне от 0,15 до 0,85; значения, находящиеся за пределами указанного диапазона не учитываются), соответствующую нанесенным точкам, и определяют ординату для дозы комплемента, приводящей к 50% гемолизу, т.е. Y/(1-Y)=1. Вычисляют активность комплемента в исходном растворе, выраженную в гемолитических единицах (СН 50 /мл), по формуле (4): СН 50 /мл = В С∙5 , где: В – величина, обратная степени разведения комплемента; С – объем разведенного комплемента (мл); вызывающий 50% гемолиз (Y/(1-Y)=1); 5 – множитель для учета количества эритроцитов. Результат титрования комплемента считают достоверным при условии, что наклон прямой составляет от 0,15 до 0,40, предпочтительно в интервале 0,18-0,30. 3176