Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

Затем в каждую пробирку (пробирки 1-12 и пробирки с контрольными пробами) добавляют по 0,2 мл гемолитической системы, тщательно перемешивают и инкубируют в термостате при температуре 37±0,5 ° С в течение 60 мин, затем охлаждают 10 мин при температуре 5±3 ° С и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 5 мин. Измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 541 нм. Раствор сравнения – буферный раствор. Рассчитывают степень гемолиза (Y) по формуле (3) и строят график аналогично, как указано в разделе «Титрование комплемента». Если центрифугирование и/или считывание результатов не может быть проведено немедленно, пробы хранят при температуре 5±3 ˚ С не более 1 ч. Учет и интерпретация результатов Вычисляют по формуле (4) активность комплемента в гемолитических единицах (CH 50 /мл) для испытуемого образца иммуноглобулина, контрольных образцов (положительный и отрицательный контроли) и контроля комплемента. Антикомплементарную активность испытуемого образца иммуноглобулина (в %) и контрольных образцов (положительный и отрицательный контроли) вычисляют относительно АКА в контроле комплемента, принятой за 100%, по формуле (6): АКА = b−a b ∙ 100 % , где: b – активность комплемента (СН 50 /мл) в контроле комплемента, рассчитанная по формуле (4); a – активность комплемента (СН 50 /мл) в испытуемом образце иммуноглобулина и в контрольных образцах (положительный и отрицательный контроли), рассчитанная по формуле (4). Антикомплементарную активность испытуемого образца иммуноглобулина в СН 50 /мг белка рассчитывают по формуле (7): 3179