Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

(5,0±0,5) % СО 2 . Затем в каждую лунку с ИП и соответствующим СО вносят вирусную суспензию, содержащую рассчитанную заранее дозу индикаторно- го вируса − 100 ТЦД 50 . В лунки контроля клеток вносят такой же объем под- держивающей среды. Определение дозы вируса-индикатора Определение дозы индикаторного вируса начинают с установления его активности. Для определения активности вируса-индикатора готовят десятикратные разведения вируса в поддерживающей среде (от 10 -1 до 10 -8 ). Из лунок 96- луночного планшета с клеточным монослоем удаляют ростовую среду. После этого вносят в лунки планшета, используемые для определения дозы вируса, поддерживающую среду в объеме, равном объему испытуемого образца. За- тем вносят приготовленные разведения индикаторного вируса (не менее, чем по 4 лунки на каждое разведение) в объеме, равном объему внесенной до это- го поддерживающей среды. 96-луночный планшет с разведениями вируса инкубируют в течение 24-48 ч при температуре (37±1) 0 С в атмосфере с (5,0±0,5) % СО 2 . За титр (активность) вируса принимают величину, обратную разведению вируса, при котором клеточный монослой в 50 % лунок оказался полностью пораженным цитопатическим действием. Титр вируса выражают в тканевых цитопатических дозах – ТЦД 50 /мл. Активность вируса вычисляют методом Спирмена-Кербера по форму- ле:       − • + = 2 lg max 50 n p n d D ED , где: Lg ED 50 – десятичный логарифм титра вируса; D max – десятичный логарифм разведения, ниже которого произошла 100 % гибель клеток (+); d − десятичный логарифм интервала между разведениями (=1,0); n − число лунок, приходящееся на каждое разведение вируса (=4); 2744