Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

разведения 1/10, 1/50, 1/250 и 1/1250 для определения LD 50 тест-штамма и проверки жизнеспособности микробов в суспензии (табл. 3). Таблица 3 – Пример разведения тест-штамма B. рertussis 18323 Номер пробирки Кратность разведения Объем перено- симой суспен- зии из предыдущей пробирки в последующую, мл Объем внесенного растворителя, мл Полученная суспензия содержит в 0,03 мл (эквивалентно) Назначение 1 1 А : 3 1 2 100 млн 2 1 I : 10 0,5 4,5 10 млн 3 1 2 : 10 0,5 4,5 1 млн 4 1 3 : 10 2 18 100000 Разливают в 3 пробирки для заражения – рабочая суспензия 5 1 4 : 10 0,5 4,5 10000 Для определения LD 50 штамма 6 1 5 : 5 1,0 4,0 2000 7 1 6 : 5 1,0 4,0 400 8 1 7 : 5 1,0 4,0 80 Из пробирки 8 сразу после приготовления разведения делают посев по 0,1 мл на 3 чашки Петри со средой Борде-Жангу или КУА с кровью с целью подсчета количества содержащихся в ней живых клеток, выраженного в колониеобразующих единицах (КОЕ). Культуру помещают в термостат с температурой (36 ± 0,5) о С на 3 − 4 сут. Для определения количества КОЕ в 30 мкл проводят подсчёт выросших колоний на 3 чашках и полученное значение делят на 10. В 0,03 мл разведения из пробирки 8 должно быть не более 50 КОЕ. При разведении и в процессе заражения суспензию хранят в холодной водяной бане (вода со льдом). Продолжительность работы с микробной суспензией не должна превышать 2,5 ч с момента приготовления смыва культуры. 2766