Фармакопея. Издание XIV. Том II. Формы лекарственных средств, Лекарственное растительное сырьё, Радиофармацевтические/Генотерапевтические/Биологические/Гомеопатические лекарственные препараты и методы их анализа

Если в испытании используют высокочувствительную к коклюшным антигенам линию мышей, то заражающую дозу тест-штамма 18323 следует уменьшить до содержания 100–1000 LD 50 в объеме 0,03 мл. Заражение иммунизированных животных Мышам, иммунизированным испытуемой вакциной и референс- препаратом, через 14 − 17 сут интрацеребрально вводят по 0,03 мл рабочей суспензии живой культуры тест-штамма B. рertussis 18323 (пробирка 4) путем прокола лобной кости в точке, расположенной в 2 мм от средней линии и на 2 мм выше глаза. Для заражения используют туберкулиновые шприцы с ценой деления 0,01 мл, используя иглу № 27, имеющую короткий срез и муфту; длина свободного конца иглы от края муфты до среза должна составлять от 3 до 4 мм. Для определения величины LD 50 разведения заражающей дозы (пробирки 5, 6, 7, 8) вводят контрольным мышам соответствующих групп интрацеребрально по 0,03 мл. Мышей, погибших в течение 3 сут после заражения, исключают из опыта (неспецифическая гибель); в каждой клетке оставляют по 16 мышей. За зараженными животными наблюдают 14 сут с ежедневной регистрацией их гибели. В день учета результатов (14-е сут) в число погибших включают также всех парализованных мышей. Вычисление величины LD 50 (табл. 4) культуры тест-штамма производят по формуле Кербера: lgLD 50 = lg D N –δ(∑Li–0,5), где: D N − максимальная из испытуемых доз; δ − логарифм кратности разведения (отношение большей дозы к следующей за ней меньшей дозе); Li − отношение числа животных, погибших при введении данной дозы культуры, к общему числу животных, которым эта доза была введена; ∑Li − сумма значений Li, найденных для всех испытанных доз. Таблица 4 – Пример расчета величины LD 50 культуры тест-штамма B. рertussis 18323 2767