Фармакопея. Издание XIV. Том IV. Биологические лекарственные препараты, Растительные средства и препараты, Гомеопатические фармацевтические субстанции

Метод постановки РТГА с вирусом гриппа (макрометод). РТГА при- меняют для установления типа и подтипа вируса, т.е. специфичности, а также для определения нарастания титров специфических антител. Постановка РТГА включает следующие этапы работы: приготовление взвеси эритроци- тов, определение гемагглютинирующего титра антигена в реакции гемагглю- тинации (РГА) и рабочей дозы вируса, постановка самой реакции. Для поста- новки реакции необходимы следующие ингредиенты: – антиген (вакцина, вируссодержащая жидкость – аллантоисная или культуральная); – иммунные сыворотки к различным серотипам вируса гриппа; – фосфатный буферный раствор рН 7,2 ± 0,2; – взвесь куриных эритроцитов, 1 %. 1. Приготовление взвеси куриных эритроцитов . Для постановки РТГА используют эритроциты петухов. Кровь у петухов берут из сердца или под- крыльцовой вены . Свежеполученную кровь от 3–5 петухов помещают во флакон со стек- лянными бусами или же с одним из антикоагулянтов (раствор Альсевера, 5% раствор натрия цитрата). Дефибринирование крови проводят немедленно пу- тем интенсивного встряхивания флакона в течение 5–7 мин при температуре (20 ± 2) ° С до выпадения волокон фибрина. Дефибринированную кровь фильтруют через 4 слоя марли, затем трех- кратно отмывают фосфатным буферным раствором (на 1 объем крови – 4 объема фосфатного буферного раствора) при центрифугировани (800 ± 200) об/мин в течение (15 ± 5) мин. Надосадочную жидкость удаляют. Из осадка, принимаемого за 100 %, готовят 1 % суспензию куриных эритроцитов по объему. 2. Определение гемагглютинирующего титра антигена . В круглодон- ных лунках плексигласового планшета готовят двукратные разведения анти- гена (титруемого вируса из испытуемой вакцины) в объеме 0,4 мл на фос- 5390