Фармакопея. Издание XIV. Том IV. Биологические лекарственные препараты, Растительные средства и препараты, Гомеопатические фармацевтические субстанции

В данном растворе эритроциты можно хранить при температуре (4 ± 2) ° С в течение 1–2 нед. Перед употреблением эритроциты необходимо трехкратно отмыть фосфатным буферным раствором с помощью центрифугирования при (800 ± 200) об/мин в течение 10 мин. 3.Приготовление консервирующего 5 % раствора натрия цитрата. 5% раствор натрия цитрата перед использованием разводят в 2 раза 0,1 М фос- фатным буферным раствором. К одной части полученного раствора натрия цитрата добавляют 2 части крови петухов. В данном растворе эритроциты могут храниться при температуре (4 ± 2) ° С в течение 3 – 5 сут. Метод постановки РТГА с вирусом гриппа (микрометод). Принцип метода, его учет и ингредиенты для реакции, проводимой микрометодом, те же, что и для проведения РТГА макрометодом. Отличие методов заключает- ся в изменении концентрации и объемов ингредиентов. Реакцию ставят на микропанели с «U»-образными лунками. 1. Приготовление 0,5 % взвеси куриных эритроцитов. Взвесь готовят из 1 % суспензии эритроцитов (макрометод) разведением ее в 2 раза фосфатным буферным раствором (в соотношении 1:1). 2. Определение гемагглютинирующего титра антигена. В каждую лун- ку микропанели одного ряда вносят фосфатный буферный раствор в объеме 50 мкл. Затем в первую лунку вносят 50 мкл антигена в разведении 1:10 и да- лее проводят титрование по принципу двукратного разведения. Из последней лунки удаляют 50 мкл. Затем в каждую лунку вносят по 50 мкл 0,5 % суспен- зии эритроцитов. Содержимое лунок перемешивают встряхиванием и остав- ляют при комнатной температуре на 40 – 45 мин до оседания эритроцитов в контроле. Реакцию оценивают по «четырехкрестовой» системе. За титр антигена, или одну агглютинирующую единицу (АЕ), принимают наибольшее разведе- ние антигена, дающее четко выраженную агглютинацию эритроцитов (+++ или ++++). Определение титра антигена сопровождается постановкой отрицатель- ного контроля на отсутствие спонтанной агглютинации эритроцитов. В каче- стве отрицательного контроля служат несколько лунок панели, в которые вместо антигена внесен фосфатный буферный раствор. 5394