Фармакопея. Издание XIV. Том IV. Биологические лекарственные препараты, Растительные средства и препараты, Гомеопатические фармацевтические субстанции

3. Приготовление рабочей дозы антигена. Рабочая доза антигена при постановке РТГА микрометодом равна 8 АЕ. Для её приготовления ге- магглютинирующий титр делят на 16. Полученное значение указывает во сколько раз необходимо развести антиген. Пример разведения антигена: титр антигена равен 160. Разделив 160 на 16, получается цифра 10, указывающая на то, что антиген необходимо разве- сти в 10 раз. Перед постановкой основного опыта проверяют точность приготовле- ния рабочей дозы (8 АЕ). Для этого в шесть лунок микропанели, начиная со второй, вносят по 25 мкл фосфатного буферного раствора. В 1 и 2 лунки до- бавляют по 25 мкл приготовленной рабочей дозы антигена. После перемеши- вания 25 мкл смеси переносят из 2 лунки в 3, из 3 – в 4 и т.д. Из последней лунки панели 25 мкл удаляют. Затем во все лунки добавляют по 25 мкл фос- фатного буферного раствора и по 50 мкл 0,5 % суспензии эритроцитов. После встряхивания смесь оставляют при температуре (20 ± 2) ° С на 40 – 45 мин до оседания эритроцитов в контроле. При правильном выборе рабочей дозы агглютинация эритроцитов должна наблюдаться только в четырех лунках панели. В остальных лунках агглютинация должна отсутствовать. В случае отклонения от указанного ре- зультата добавляют антиген или фосфатный буферный раствор для получе- ния необходимой рабочей дозы. 4. Постановка реакции торможения гемагглютинации. Метод поста- новки реакции микрометодом соответствует таковому, описанному для мак- рометода, за исключением объемов используемых ингредиентов реакции. Готовят двукратные разведения сыворотки в объеме 25 мкл, вносят ра- бочую дозу антигена (8 АЕ) в объеме 25 мкл и после контакта антигена и сыворотки (от 30 мин до 1 ч) при температуре (20 ± 2) ° С в каждую лунку панели вносят по 50 мкл 0,5 % взвеси эритроцитов. После оседания эритро- цитов в контроле (как правило, через 40 – 45 мин) проводят учет результатов (макрометод). 5395