Фармакопея. Издание XIV. Том IV. Биологические лекарственные препараты, Растительные средства и препараты, Гомеопатические фармацевтические субстанции

3. МИДэ (минимальная инфицирующая доза риккетсий для развиваю- щихся куриных эмбрионов) должна соответствовать разведению вакцины 10 -6 - 10 -8 , что определяет содержание в одной прививочной дозе вакцины от 1000 до 100000 МИДэ. Определение проводят биологическим и бактериоскопическим методом. Определение МИДэ проводят на 6 - 7 суточных интактных РКЭ, которым в полость желточного мешка вводят вакцину в разведениях от 10 -3 до 10 -8 в объе- ме 0,5 мл. Для испытания используют 2 образца (ампулы) вакцины. Содержи- мое каждой ампулы растворяют в 5 мл стерильной 20 % молочно-буферной изотонической смеси (МБС) и объединяют. Полученная суспензия содержит живой компонент вакцины в разведении 10 -3 . Далее готовят ряд последователь- ных десятикратных разведений от 10 -4 до 10 -8 . Каждым разведением вакцины заражают по 10 РКЭ, которые после введения вакцины инкубируют при темпе- ратуре 34 - 36 о С и относительной влажности воздуха 40 - 60 % в течение 13 сут. Эмбрионы, погибшие с 5 по 13 сут, вскрывают в день гибели, оставшиеся живыми - на 13 сут. С помощью стерильного анатомического пинцета из каж- дого эмбриона извлекают кусочек желточной оболочки, который после промы- вания в стерильном 0,9 % растворе натрия хлорида рН 6,8-7,2 тщательно расти- рают на обезжиренном предметном стекле. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют смесью Никифорова, состоящей из равных объемов спирта этило- вого и эфира диэтилового, затем окрашивают по методу Романовского – Гимза. Примечания Окраска по методу Романовского – Гимза. 1.Краситель Азур-Эозин по Романовскому (в растворе) Приготовление фосфатно-буферного раствора (ФБР). Приготовление ФБР осуществляют в соответствии с инструкцией по применению красителя Азур - Эозин по Романовскому (в растворе). Для приготовления ФБС допускается ис- пользование готовых наборов «Фосфатный буфер» с рН 6,8-7,2. Раствор ис- пользуют для разведения красителя и промывки стекол. Фосфатный буферный раствор хранят в плотно закрытом флаконе при температуре 2 – 8 0 С в течение трех мес, при комнатной температуре - не более одного мес. Приготовление раствора красителя. Непосредственно перед окраской мазков готовят раствор красителя: смешивают краситель Азур - Эозин с фос- фатно-буферным раствором в соотношении 1:5 – 1:20 и фильтруют через двой- 5619