Фармакопея. Издание XIV. Том IV. Биологические лекарственные препараты, Растительные средства и препараты, Гомеопатические фармацевтические субстанции

ки) и инкубируют в термостате в течение 30 – 40 мин при температуре (37 ± 1) ° С, затем выдерживают в холодильнике при температуре (6 ± 2) ° С в тече- ние 24 – 48 ч. Полученную иммунную сыворотку отбирают в стерильные пробирки и исследуют в РМА для выявления специфических антител к штаммам лептоспир 4 серогрупп, входящих в состав вакцины. Методика реакции микроагглютинации (РМА) РМА ставят в лунках полистиролового планшета. В лунки с А1 по А4 вносят по 0,2 мл анализируемой сыворотки, разведенной 1:25 0,9 % раство- ром натрия хлорида. В лунки с В1 – В4 по F1 – F4 вносят по 0,1 мл 0,9 % рас- твора натрия хлорида. Разведение сыворотки осуществляют автоматической пипеткой в направлении лунок от А к F (в вертикальном ряду), перенося по 0,1 мл каждого разведения в следующую в ряду лунку, получая таким обра- зом разведения сыворотки с 1:25 до 1:800. В качестве антигенов используют 7 – 12-суточные культуры лептоспир 4 серогрупп ( L. interrogans Icterohaemorrhagiae copenhageni, L. interrogans Grippotyphosa grippotyphosa, L. interrogans Pomona mozdoc, L. interrogans Sejroe sejroe ) , выращенные на среде Терских. При нанесении 0,02 мл культу- ры каждой серогруппы на предметное стекло количество лептоспир должно быть не менее 100 – 150 клеток в поле зрения микроскопа при увеличении 200×. После разведения сыворотки в каждый ряд лунок от А1 до F1, от А2 до F2, от А3 до F3 и от А4 до F4 вносят по 0,1 мл культуры лептоспир соответ- ствующей серогруппы. После добавления антигенов получают разведение сывороток от 1:50 до 1:1600 в каждом вертикальном ряду. Одновременно проводят контроль культур: в 4 лунки (Н1, Н2, Н3, Н4) вносят по 0,1 мл 0,9 % раствора натрия хлорида и по 0,1 мл живой культуры лептоспир каждой се- рогруппы в отдельности. Планшет выдерживают в течение 1 ч при темпера- туре (37 ± 1) °С. Из лунок планшета с определенной серогруппой отбирают по 0,02 мл смеси сыворотки и культуры лептоспир, наносят на предметное 5286